肝活检在各类肝脏疾病诊疗过程中极具意义，超声引导下肝粗针活检已成为临床获得肝组织的首选方法［1,2,3,4］。然而，出血作为活检的主要并发症，发生率为0.1%~3.6%［5］，若不及时发现和处理，常可造成严重的临床后果。明胶海绵填塞止血法因其价格低廉、效果较为可靠，已常用于临床活检中。然而明胶海绵条并无标准规格、引入针道费时费力，常因操作者不熟练存在过粗绵条嵌顿无法置入或过细绵条滑脱的情况［6-7］，因此对操作者经验水平要求极高。临床迫切需要一种止血效果确切且操作简便、易于掌握的肝粗针活检后的止血方式。
射频消融近二十年来已经成熟应用于肝肿瘤消融，其在多器官的针道出血并发症中，作为有效、快速、微创的方法，已有越来越多的研究和临床应用，有望成为介入栓塞、开腹手术之前最佳的止血方式。不过，当前专为肿瘤消融设计的射频消融针，若应用于肝粗针活检止血中，存在型号不匹配、单极针需贴电极片、水冷循环操作复杂、价格昂贵等诸多不足，因此，研发一款专用于器官粗针活检后止血的射频消融针成为临床较为迫切的需求。
本研究设计研发一款专用于针道止血的双极射频活检针应用于活体猪肝的粗针活检实验，并与不作止血处理、明胶海绵填塞处理进行对照研究，旨在探讨双极射频活检针在超声引导下行肝粗针活检后针道止血的有效性、便捷性和应用价值。
材料与方法
一、对象
5头雌性家猪（45.1~55.0 kg），由浙江中医药大学中医药科学院中心提供，购自江苏省泰州泰和生物科技有限公司。所有动物在标准环境下饲养，并在进行任何操作前至少用标准饲料喂养1周。本实验经过浙江中医药大学实验动物管理与伦理委员会审核，符合动物保护、动物福利和伦理原则，并由浙江中医药大学实验动物管理与伦理委员会提供伦理许可。实验动物伦理批准编号：IACUC-20220425-08。
二、仪器与方法
操作步骤：（1）将装有密封针芯的外套管针穿刺进入目标组织后，将密封针芯取出，替换为活检取样针，对目标组织进行取样，拔出活检取样针后，对所取得的组织样本进行收集送检。（2）将射频消融针芯插入外套管针，连接于射频发生器上，启动射频发生器后，超声监测下发生针道气化后，开始将装有射频消融针芯的外套管针缓慢退出，完成针道消融操作。
2. 活检术：家猪呈仰卧位，充分麻醉后，使其充分暴露腹部并固定。剃毛后，用聚维酮碘溶液彻底消毒整个腹部。利用手术刀及电凝刀逐层切开腹壁，暴露肝脏，在超声引导下行肝脏活检术。肝脏的每个叶都有独立的血液供应，因此本实验中选择了左外叶、左内叶、右内叶、右外叶进行肝脏活检术操作，从而确保不同的止血方式能够不影响其他叶的出血结果。
利用16 G活检针依次对猪肝每叶行1次超声引导下常规穿刺活检，在不做任何止血措施情况下通过干棉球吸收穿刺部位的血液称重，评估活检后失血量，并记录出血时间，作为实验对照组。为了减少肝脏不同部位异质性带来的出血差异，本实验选择在原有穿刺针道旁1 cm，再次行穿刺活检，分别应用4种不同的止血干预措施，包括明胶海绵填塞（明胶海绵组）和射频消融针道（射频组，包括功率40 W，针温70 ℃、功率30 W，针温90 ℃以及功率40 W，针温90 ℃三种方式）。本实验将在4片肝叶上无止血措施后的出血结果称为对照组1、对照组2、对照组3、对照组4。记录不同干预措施下肝活检后的失血量及出血时间。术后即刻行戊巴比妥过量注射法将家猪处安乐死。
三、统计学分析
使用SPSS 26.0以及GraphPad Prism 8.3.0进行数据分析。操作时间、出血量和出血时间为符合正态分布的计量资料，均以
表示，采用Tukey-Kramer事后检验比较4种不同止血方式的实验组和对照组上述资料的差异。P<0.05为差异具有统计学意义。
表示，采用Tukey-Kramer事后检验比较4种不同止血方式的实验组和对照组上述资料的差异。P<0.05为差异具有统计学意义。结果
5头猪共计40处肝脏活检术以及术后止血操作在超声引导下均顺利完成，无并发症发生。将4种不同止血操作的操作时间进行比较，并将应用4种不同止血操作后的针道出血量、出血时间与对照组进行比较。
图2 超声引导下双极射频活检针止血过程。图a示避开周围大血管进行肝脏活检（白色箭头代表活检针道）；图b：活检完成后，沿针道出现红色反流束，提示存在针道出血（红色箭头）；图c和图d：应用双极射频活检针进行针道止血后，灰阶超声显示消融后针道出现气化（图c黑色箭头），彩色多普勒上显示针道血流信号消失（图d黑色箭头） |
图3 4种不同止血措施干预下的操作时间、出血量、出血时间比较。图a、b、c分别示4种不同止血操作的操作时间、出血量和出血时间比较结果，图d、e为4种不同止血操作后的针道出血量、出血时间与对照组比较的结果。射频组操作时间明显短于明胶海绵组，所有止血操作均能起到较好的针道止血效果，均较其邻近未止血针道的出血量、出血时间减少注：ns表示P>0.05，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001 |
表1 猪肝活检术后4种止血措施的操作时间比较结果 |
| 实验分组 | 平均值差值（s） | 标准误差（s） | P值 | 差值的95%置信区间 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 下限 | 上限 | ||||
| 明胶海绵组 vs 射频组（40 W、70 ℃） | 160.600 | 28.384 | 0.005 | 81.793 | 239.407 |
| 明胶海绵组 vs 射频组（30 W、90 ℃） | 159.800 | 29.071 | 0.005 | 79.085 | 240.510 |
| 明胶海绵组 vs 射频组（40 W、90 ℃） | 162.000 | 29.535 | 0.005 | 79.998 | 244.002 |
表2 猪肝活检术后4种止血措施干预后的出血量与对照组比较结果 |
| 实验分组 | 平均值差值（g） | 标准误差（g） | P值 | 差值的95%置信区间 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 下限 | 上限 | ||||
| 对照组1 vs 明胶海绵组 | 21.824 | 3.416 | 0.003 | 12.339 | 31.309 |
| 对照组2 vs 射频组（40 W、70 ℃） | 23.932 | 2.893 | 0.001 | 15.900 | 31.964 |
| 对照组3 vs 射频组（30 W、90 ℃） | 25.738 | 1.947 | <0.001 | 20.331 | 31.145 |
| 对照组4 vs 射频组（40 W、90 ℃） | 24.518 | 2.809 | 0.001 | 16.718 | 32.318 |
表3 猪肝活检术后4种止血措施干预后的出血时间与对照组比较结果 |
| 实验分组 | 平均值差值（s） | 标准误差（s） | P值 | 差值的95%置信区间 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 下限 | 上限 | ||||
| 对照组1 vs 明胶海绵组 | 78.8 | 20.2 | 0.018 | 22.6 | 135.0 |
| 对照组2 vs 射频组（40 W、70 ℃） | 76.4 | 11.5 | 0.003 | 44.4 | 108.4 |
| 对照组3 vs 射频组（30 W、90 ℃） | 92.0 | 15.8 | 0.004 | 48.2 | 135.8 |
| 对照组4 vs 射频组（40 W、90 ℃） | 102.0 | 16.4 | 0.003 | 56.5 | 147.4 |
讨论
本研究报道了本团队自主研发的一款双极射频活检针，以最简洁的操作流程配套粗针活检，达到简单、快速、高效地控制肝脏粗针穿刺后止血目的。双极射频活检针具有以下两个优点：（1）采用单针双极射频设计，通过绝缘材料在前端隔离出正、负两极，使得电流不通过全身，故局部电流密度更大，消融体积更大，而且患者身上不需要放置另外的体表电极板，操作方便；（2）配有精准测温系统，通过热电偶温度传感器实时采集组织温度，根据温度情况射频发生器通过PID（比例、积分、微分）算法实时控制射频电流输出，快速达到设定的消融控制温度后并维持该温度。
本实验在解剖结构方面更接近于人类的猪模型上进行肝穿刺活检，阐明双极射频活检针进行肝穿刺活检的操作简便性和止血有效性。本实验中技术成功率为100%，且所有操作方式均未出现并发症。实验结果表明，射频组操作时间明显短于明胶海绵组，操作者仅需要在术前对射频功率及针尖温度进行设置，活检术后插入射频电极，启动射频消融仪即可在10 s内完成对针道的消融。此外，本实验考虑到针道消融的安全性和可操作性问题，双极射频活检针的温度传感器安装在靠近针尖热场区的位置，以实时监测针尖温度，并将针温和射频功率实时显示在显示器上。通过针尖实时温度反馈和实时超声图像监测，操作者可以实现对针道消融过程的准确控制。有超声介入基础的医师可以在短时间的适应后，快速掌握双极射频活检针的消融针道方法。
此外，本实验结果表明，射频组的肝穿刺后出血量较对照组能够减少70 g以上的出血。当针尖温度设定至70 ℃以上时，所有实验组均能够在拔针后立即停止出血。相比之下，当运用明胶海绵填塞方式止血时，尽管肝穿刺后出血量和出血时间较对照组明显减少，但仍有部分实验组可观察到渗血的情况。
本实验的局限性：（1）本研究是在一个开放性腹部手术的状态下进行的，未能完全模拟经皮超声引导下存在的一些技术难度；（2）对来自针道消融引起的疼痛的耐受性未进行探究；（3）未探索在凝血功能异常状态下的针道止血效果。上述这些局限性有望在之后的实验中进行较好地补充。
综上所述，与临床常用的明胶海绵填塞方式相比，应用双极射频活检针能够更快速简便地达到同样的止血效果，具有较高的技术成功率和止血成功率，同时可用超声监测针道消融过程，是一种安全可靠、快速简便的肝穿后针道止血新方式。因此，新型双极射频活检针能够安全地行超声引导下肝穿刺活检，止血效果确切，且比明胶海绵填塞操作简便、可靠，本实验为后期临床普及应用提供了证据，具有一定的临床应用价值。