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中华医学超声杂志（电子版）

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2024 , Vol. 21 >Issue 12: 1132 - 1141

DOI: https://doi.org/10.3877/cma.j.issn.1672-6448.2024.12.006

基础研究

低强度超声缓解顺铂所致小鼠卵巢损伤的实验研究

  • 周圆圆 1 ,
  • 周怡 1 ,
  • 段亚阳 1 ,
  • 张怡卿 1 ,
  • 朱峰宇 1 ,
  • 张超学 , 1, †
展开
  • 1.230022 合肥，安徽医科大学第一附属医院 国家卫生健康委配子及生殖道异常研究重点实验室
张超学，Email：
Zhang Chaoxue, Email:

Copy editor: 汪荣

收稿日期: 2024-11-28

  网络出版日期: 2025-01-23

版权

版权归中华医学会所有。 未经授权，不得转载、摘编本刊文章，不得使用本刊的版式设计。 除非特别声明，本刊刊出的所有文章不代表中华医学会和本刊编委会的观点。
收起

Alleviation of cisplatin-induced ovarian damage in mice by low-intensity ultrasound: an experimental study

  • Yuanyuan Zhou 1 ,
  • Yi Zhou 1 ,
  • Yayang Duan 1 ,
  • Yiqing Zhang 1 ,
  • Fengyu Zhu 1 ,
  • Chaoxue Zhang , 1, †
Expand
  • 1.The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Key Laboratory of Gametes and Reproductive Tract Anomalies Research, National Health and Wellness Commission, Hefei 230022, China

Received date: 2024-11-28

  Online published: 2025-01-23

Copyright

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Fold

摘要

目的

探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对顺铂所致小鼠卵巢细胞损伤的缓解作用。

方法

将40 只ICR 小鼠分为对照组（n=12）、顺铂组（n=14）、顺铂+LIPUS 组（n=14），对照组小鼠腹腔注射生理盐水，顺铂组小鼠腹腔注射顺铂，顺铂+LIPUS 组小鼠腹腔顺铂注射、次日LIPUS 照射，周期共2 周。取小鼠卵巢行HE 染色、RNA 测序、免疫组化、TUNEL 染色、蛋白质免疫印迹（western blot）及实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR），进行卵泡计数，检测卵巢中凋亡、铁死亡及氧化应激等细胞生理事件相应细胞因子表达水平。

结果

与对照组相比，顺铂组卵巢体积缩小；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组小鼠的卵巢体积增大。对照组、顺铂组与顺铂+LIPUS 组的卵巢重量比较[（8.8±1.34）mg vs （2.8±0.45）mg vs （5.6±1.35）mg]，差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比，顺铂组原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及有腔卵泡的数目减少；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组相应各级卵泡数目增多（P＜0.05）。LIPUS 治疗与否差异基因主要富集在细胞生理水平事件上，如细胞凋亡、铁死亡及氧化应激方面。与对照组相比，顺铂组Bax、p-H2AX、TUNEL 信号、3-Nit、4-HNE 及8-OHdG 表达增加，Bcl2、SIRT1、SIRT2、Nrf2、FPN、GPX4、Fth、Ftl 等因子表达减少（P＜0.05）；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组Bax、p-H2AX、TUNEL 信号、3-Nit、4-HNE 及8-OHdG 表达减少，Bcl2 及铁死亡相应各因子除SIRT2 外表达均增加（P＜0.05）。

结论

LIPUS 可以缓解顺铂所致小鼠卵巢损伤，其机制可能是通过调控凋亡、铁死亡及氧化应激细胞因子的表达。

关键词： 低强度超声; 卵巢; 顺铂; 凋亡; 铁死亡; 氧化应激; 小鼠

本文引用格式

周圆圆 , 周怡 , 段亚阳 , 张怡卿 , 朱峰宇 , 张超学 . 低强度超声缓解顺铂所致小鼠卵巢损伤的实验研究[J]. 中华医学超声杂志（电子版）, 2024 , 21(12) : 1132 -1141 . DOI: 10.3877/cma.j.issn.1672-6448.2024.12.006

Abstract

Objective

To investigate the repairing effect of low-intensity ultrasound (LIPUS)on cisplatin-induced ovarian cell damage in mice.

Methods

Forty ICR mice were divided into a control group (n=12), a cisplatin group (n=14), and a cisplatin+LIPUS group (n=14).Control mice were injected intraperitoneally with saline, mice in the cisplatin group were injected intraperitoneally with cisplatin, and the cisplatin+LIPUS group underwent intraperitoneal cisplatin injection, followed by LIPUS irradiation on the next day.The treatment cycle was 2 weeks long.Mouse ovary tissues were taken for HE staining for follicle counting.RNA sequencing, immunohistochemistry, TUNEL staining, protein immunoblotting (Western blot), and real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qPCR) were performed to detect the expression of cytokines in different cellular physiological events in the ovaries such as apoptosis, iron death,and oxidative stress.

Results

Compared to the control group, ovarian size was reduced in the cisplatin group; compared to the cisplatin group, ovary size was increased in the cisplatin+LIPUS group.Comparison of ovarian weights in the control, cisplatin, and cisplatin+LIPUS groups (8.8±1.34 vs 2.8±0.45 vs 5.6±1.35)revealed statistically significant differences (P＜0.05).Compared to the control group, the number of primordial follicles, primary follicles, secondary follicles and antral follicles was reduced in the cisplatin group; compared with the cisplatin group, the number of follicles at the corresponding levels was increased in the cisplatin+LIPUS group (P＜0.05).Between mice with LIPUS treatment and controls, differential genes were mainly enriched in events at the cellular physiological level, such as apoptosis, iron death, and oxidative stress.Compared to the control group, Bax, p-H2AX, TUNEL signal, 3-Nit, 4-HNE, and 8-OHdG levels were increased, while the levels of factors such as Bcl2, SIRT1, SIRT2, Nrf2, FPN, GPX4, Fth, and Ftl were reduced in the cisplatin group (P＜0.05); compared with the cisplatin group, the levels of Bax,p-H2AX, TUNEL signal, 3-Nit, 4-HNE, and 8-OHdG were reduced, while the levels of Bcl2 and iron death factors except SIRT2 were increased (P＜0.05).

Conclusion

LIPUS can alleviate cisplatin-induced ovarian damage in mice, possibly by regulating apoptosis, iron death, and oxidative stress.

Key words： Low-intensity ultrasound; Ovary; Cisplatin; Apoptosis; Iron death; Oxidative stress; Mice

近年来，女性患癌率呈逐年上升趋势[1]，化疗是当前癌症治疗的主要方式。铂类药物广泛应用于化疗中，其主要作用机制是干扰DNA 修复机制，引发DNA 损伤并导致细胞凋亡及细胞死亡，在增殖细胞快的细胞中作用尤其明显[2]。但由于铂类药物作用器官的特异性较低，在育龄期，周期性卵泡发育及高度增殖的卵巢细胞成为化疗药物攻击的主要靶点[3]，引起的卵巢损害主要包括但不限于卵巢储备功能下降、不孕和卵巢萎缩。因此，寻求在女性化疗过程中减轻卵巢损伤的方法具有重要意义。
低强度脉冲超声（low intensity pulsed ultrasound，LIPUS）是一种无创的治疗方式，已有研究证明，其可影响细胞物质代谢过程，加速组织代谢，改善缺血和缺氧状态，有效抵抗氧化应激，增强组织营养，并促进组织修复[4]。目前研究发现LIPUS 可以通过改善铁死亡途径抑制阿霉素诱导的慢性肾脏损伤[5]，关于LIPUS 对于卵巢铁死亡方面的调控尚无相关研究报道。有研究表明，通过抑制SIRT1及SIRT3 介导的铁死亡途径可改善多囊卵巢综合征[6-7]。目前，LIPUS 对化疗所致卵巢细胞损伤的具体影响尚不清楚。本研究旨在探究LIPUS 对改善化疗所致卵巢损伤的具体作用及可能的作用机制，为育龄期癌症化疗患者的卵巢功能提供一种可行的无创保护措施。

材料与方法

一、实验动物及分组

从安徽医科大学实验动物中心购入ICR 品系7周的雌鼠40 只，体重25 ～35 g，实验动物生产许可证号：SCXK（皖）2022-001。将购入的雌鼠放置1 周适应环境。实验动物在实验室条件下进行严格的饲养，饲养条件为：温度25℃，空气湿度为40%～70%，保持每天10 h 的光照，充足的食物和水，每周换2 ～3 次垫料，保持饲养环境舒适。所有实验程序均已获得伦理委员会及动物护理和使用委员会批准（批件号：20232078）。

二、实验试剂及仪器

1.实验试剂：顺铂（HY-17394）购自MCE（New Jersey，USA），生理盐水，双蒸水，TBST缓冲液，PBS 缓冲液，4%多聚甲醛，酒精，二甲苯，石蜡，苏木素，伊红，柠檬酸钠缓冲液，Bax抗体，Bcl2 抗体，GAPDH 抗体，免疫组化试剂盒（中杉金桥，中国北京），一步法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（碧云天，中国上海）。
2.仪器：LIPUS 仪器（RH2022D08，重庆中国），超声破碎仪（SCIENTZ，中国宁波），光学显微镜（德国LEICA），倒置荧光显微镜（德国ZEISS），电泳仪（Tanon，中国上海），超灵敏多功能成像仪（Tanon，中国上海）。

三、实验方法

1.实验造模及流程：适应环境1 周后，将实验小鼠随机分配为对照组12 只、顺铂组14 只及顺铂+LIPUS 组14 只。实验周期为2 周，对照组小鼠隔天腹腔注射100 μl 生理盐水；顺铂组小鼠及顺铂+LIPUS 组小鼠隔天腹腔注射浓度为2 mg/kg 的顺铂100 μl，共注射7 次；注射24 h 后顺铂+LIPUS 组小鼠进行低强度超声照射，共照射7 次，照射参数为：200 mW/cm²，频率0.3 MHz，重复频率1000 MHz，占空比20%，脉宽200 μs[8]。双侧照射，每次15 min。2 周结束后将小鼠进行脱臼处死，取卵巢组织，行后续各实验技术方法检测相应指标（图1）。
图1 小鼠造模实验流程图

注：LIPUS 为低强度脉冲超声；Day1 ～Day14 为第1 ～14 天

2.实验技术方法：（1）小鼠一般情况的观察：实验过程中，每天密切观察小鼠的精神状态，毛发光泽，腹泻情况及活动力。（2）HE 染色及卵泡计数：取各组小鼠单侧卵巢连续切片，进行HE 染色，在光学显微镜下观察各级卵泡形态及分布情况，进行卵泡计数，为了避免重复计数，本研究只对有细胞核的卵泡进行计数。（3） RNA-seq 转录测序：LIPUS照射结束后，取各组小鼠卵巢组织，并由安徽合肥诺为尔基因科技服务有限公司完成mRNA 的定量研究及高通量测序，筛选差异基因并进行通路富集分析。（4）免疫组织化学染色：取各组小鼠卵巢切片进行脱蜡水化后，进行抗原修复，使用免疫组化试剂盒依次阻断内源性过氧化物酶及反应增强液，孵育一抗过夜，次日孵育二抗后，滴加DAB 显色试剂显色，镜下观察，计算机拍照后使用Image J 软件进行数据分析。（5）TUNEL 染色：取各组小鼠卵巢切片进行脱蜡水化后，使用一步法TUNEL 检测试剂盒对切片进行染色处理，切片干燥后，进行封片，暗室内倒置荧光显微镜下进行观察，其中发生凋亡的卵巢细胞会被染成绿色信号，而有活性的细胞核会被标记为蓝色，计算机拍照后使用Image J 软件进行数据分析。（6）实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative rea-time-PCR，qPCR）：提取总RNA 并测定其浓度，合成cDNA，对cDNA 进行逆转录，配制20 μl 反应体系，95℃预热5 min，95℃预变性10 s，55 ～60℃退火20 s，72℃延伸30 s 的条件重复40个循环进行qPCR 测定。引物序列见表1。（7） 蛋白质免疫印迹检测（western blot）：使用超声波细胞粉碎机将组织碾碎，RIPA 裂解液提取出蛋白质，后制胶，对蛋白质样本进行电泳、转膜、封闭，孵育一抗过夜后，弃去一抗孵育二抗，后加入曝光液，使用化学发光成像系统对条带进行显色，留存图片后使用Image J 软件进行数据处理。
表1 小鼠卵巢组织引物序列
基因名 正向序列（5'→3'） 反向序列（3'→5'）
SIRT1 GCTGACGACTTCGACGACG TCGGTCAACAGGAGGTTGTCT
SIRT2 GCCTGGGTTCCCAAAAGGAG GAGCGGAAGTCAGGGATACC
Nrf2 AGTGACTCGGAAATGGAGGAG TGTGCTGGCTGTGCTTTAGG
FPN GTGGAGTACTTCTTGCTCTGG CTGCTTCAGTTCTGACTCCTC
GPX4 GATGGAGCCCATTCCTGAACC CCCTGTACTTATCCAGGCAGA
Fth CCATCAACCGCCAGATCAAC GAAACATCATCTCCGTCAAA
Ft1 CGTCTCCTCGAGTTTCAGAAC CTCCTGGGTTTTACCCCATTC

四、统计学分析

采用GraphPad Prism 9.3 软件对实验数据进行统计学分析，符合正态分布的计量资料以±s 表示。多组间数据比较采用单因素方差分析，两组间比较采用最小显著性差异法（LSD-t 检验）。P＜0.05 认为差异具有统计学意义。

结 果

一、小鼠一般情况观察

与对照组相比，顺铂组小鼠在注射顺铂的2 周时间内，精神状态较为萎靡，毛发欠光泽，有轻微的腹泻，活动力减低，卵巢体积缩小；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组小鼠的一般情况有所好转，卵巢体积增大（图2a）。对照组、顺铂组与顺铂+LIPUS 组的卵巢重量比较[（8.8±1.34）mg vs（2.8±0.45）mg vs （5.6±1.35）mg]，差异有统计学意义（P＜0.05，图2b）。
图2 各组小鼠卵巢体积大小比较及卵巢重量定量分析图。图a 示对照组、顺铂组及顺铂+低强度脉冲超声（LIPUS）组卵巢大小；图b 为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组卵巢重量定量分析柱状图（*表示P＜0.05；****表示P＜0.0001）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

二、小鼠卵巢组织HE 染色及卵泡计数

HE 染色及卵泡计数结果显示，与对照组相比，顺铂组小鼠原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及有腔卵泡数目减少（P＜0.05）；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组各级卵泡数目增加（P＜0.05，图3、表2）。
表2 不同组别小鼠各级卵泡计数比较（±s ）
组别 数量（只） 原始卵泡 初级卵泡 次级卵泡 有腔卵泡
对照组 6 15.50±3.14 16.50±7.01 63.83±6.94 5.33±2.25
顺铂组 6 3.67±1.63a 2.50±1.76a 14.83±5.74a 1.00±0.63a
顺铂+LIPUS组 6 14.00±4.10b 20.00±5.14b 66.33±16.08b 3.33±1.86b
P值 ＜0.0001 ＜0.0001 0.011 0.015
图3 各组小鼠卵巢HE 染色图像。图a ～c 分别为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组卵巢HE 染色图像（×50）；图d ～f 分别为3 组卵巢HE 染色图像（×100）；图g ～i 分别为3 组卵巢HE 染色图像（×200）（箭头所示为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及有腔卵泡）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

三、LIPUS 对小鼠卵巢组织基因表达的影响

对RNA 测序结果进一步分析处理，发现3 组间差异基因主要富集在铁死亡、凋亡及氧化应激等生理水平事件信号通路上（图4）。
图4 三组小鼠的转录组测序及生物信息学分析图。图a，b 分别为顺铂组与对照组、顺铂组与顺铂+LIPUS 组差异基因KEGG 富集散点图（纵轴表示通路名称，横轴表示富集因子，点的大小表示此通路中差异表达基因个数多少，而点的颜色对应于不同的Q 值范围）；图c，d 分别为顺铂组与对照组、顺铂组与顺铂+LIPUS 组显著富集KEGG 注释分类条形图（纵轴表示通路名称，横轴表示基因个数）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

四、LIPUS 对小鼠卵巢组织细胞凋亡的影响

免疫组化染色结果显示，与对照组相比，顺铂组Bax 表达增加，Bcl2 表达减少；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组Bax 表达减少，Bcl2 表达增加（P＜0.05、图5，6）。Western blot 结果显示，与对照组相比，顺铂组Bax 及p-H2AX 蛋白表达增加；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组Bax 及p-H2AX 蛋白表达减少（P＜0.05，图7）。TUNEL染色结果显示，与对照组相比，顺铂组细胞凋亡信号增多；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组细胞凋亡信号减少（P＜0.05，图8，9）。
图5 各组小鼠卵巢组织Bax、Bcl2 因子表达的免疫组化图像（×200）。图a ～c 分别为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组卵巢组织Bax 因子表达免疫组化图像；图d ～f 分别为3 组卵巢组织Bcl2 因子表达免疫组化图像

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

图6 各组小鼠卵巢组织Bax、Bcl2 因子定量分析图。图a 为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组卵巢组织Bax 因子定量分析柱状图；图b 为3 组卵巢组织Bcl2 因子定量分析柱状图（*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；***表示P＜0.001）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

图7 各组小鼠卵巢组织细胞凋亡相关因子表达的Western blot 图像及定量分析图。图a 为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组小鼠卵巢组织p-H2AX、Bax、GAPDH 因子表达的Western blot 图像；图b，c 分别为3 组p-H2AX/GAPDH、Bax/GAPDH 因子表达的定量分析柱状图（*表示P＜0.05；**表示P＜0.01）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

图8 各组小鼠卵巢细胞凋亡情况TUNEL 染色图像。图a ～c 分别为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组TUNEL 染色图像；图d ～f 分别为3 组细胞核染色图像；图g ～i 分别为3 组TUNEL 及DAPI 染色合成图像

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

图9 各组小鼠卵巢细胞凋亡的定量分析柱状图（**表示P＜0.01；***表示P＜0.001）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

五、LIPUS 对小鼠卵巢组织细胞铁死亡的影响

qPCR 结果显示，与对照组相比，顺铂组小鼠卵巢组织中SIRT1、Nrf2、FPN、Fth、Ftl、SIRT2及GPX4 因子的表达水平显著降低（P＜0.05）；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组小鼠卵巢组织中SIRT1、Nrf2、FPN、Fth、Ftl 及GPX4 因子的表达水平显著升高（P＜0.05，图10）。
图10 各组小鼠卵巢组织铁死亡相关因子m-RNA 相对表达水平柱状图。图a ～g 分别为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS组卵巢组织SIRT1、Nrf2、GPX4、SIRT2、FPN、Fth 及Ftl 因子mRNA 相对表达水平的定量分析柱状图（*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；***表示P＜0.001；****表示P＜0.0001）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

六、LIPUS 对小鼠卵巢组织氧化应激的影响

免疫组化结果显示，与对照组相比，顺铂组3-Nit、4-HNE 及8-OHdG 表达增加；与顺铂组相比，顺铂+LIPUS 组相应氧化应激因子表达减少（P＜0.05，图11）。
图11 各组小鼠卵巢组织相应氧化应激因子表达的免疫组化图像（×200）及定量分析图。图a ～c 为对照组、顺铂组及顺铂+LIPUS 组3-Nit 因子表达的免疫组化图像；图d ～f 为3 组4-HNE 因子表达的免疫组化图像；图g ～i 为3 组8-OHdG 因子表达的免疫组化图像；图j ～l 分别为3 组3-Nit、4-HNE 及8-OHdG 的定量分析柱状图（**表示P＜0.01；***表示P＜0.001；****表示P＜0.0001）

注：LIPUS 为低强度脉冲超声

讨 论

顺铂作为临床上常用的化疗药物，表现出中度的性腺毒性，且往往以剂量和时间依赖式的方式导致严重的卵巢损伤[9-10]，由于卵巢的周期性发育和卵巢细胞的高度增殖，卵巢成为顺铂在育龄期女性化疗中主要的攻击目标。既往研究表明，顺铂诱导的卵巢损伤主要表现为但不限于生长卵泡闭锁、原始卵泡过度激活、间质纤维化、急性血管卵巢毒性[11]，卵巢细胞凋亡的数目直接决定了卵巢功能的好坏，卵巢功能受损会导致生育问题，并增加心血管疾病和骨质疏松症的发生风险[12-13]。因此，探索可行的卵巢保护措施，对女性患者在常规癌症化疗中生育能力及生活质量的改善具有重要意义。
本研究首先观察了各组小鼠卵巢组织的HE 染色，发现顺铂处理后的小鼠卵巢体积缩小，原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及有腔卵泡数目明显减少，经过LIPUS 照射后的小鼠卵巢体积增大，各种卵泡数目较顺铂组有所上升，说明LIPUS 可以减少顺铂所致小鼠卵泡的丢失，提示LIPUS 可以作为一种保护卵巢生育力的方式。研究进一步送检了小鼠卵巢进行测序，发现LIPUS 对卵巢细胞某些生理水平上的事件具有干扰作用，如凋亡、铁死亡及氧化应激，因此本研究对LIPUS 是否从凋亡、铁死亡及氧化应激几个方面来影响小鼠卵巢功能进行初步研究。
细胞凋亡作为生命体的基本现象，是维持体内细胞数量动态平衡的基本方式。本研究对LIPUS照射后顺铂所诱导小鼠卵巢细胞凋亡情况进行了检测。当前普遍认为，Bcl-2 家族蛋白是负责调控细胞凋亡的关键步骤，主要的两种蛋白是抗凋亡蛋白Bcl-2 和促凋亡蛋白Bax[14]。通过对小鼠卵巢切片免疫组化染色分析后发现，顺铂组小鼠Bax 表达增加，Bcl-2 表达减少，而LIPUS 照射后这两种蛋白水平发生了逆转，结合LIPUS 小鼠卵巢组织中TUNEL 信号减少的情况，说明LIPUS 能抑制小鼠细胞的凋亡。p-H2AX 已被普遍认为是DNA 双链断裂的分子标志，Western blot 结果表明，LIPUS照射后Bax 及p-H2AX 的表达减少，同样说明LIPUS 能够改善小鼠细胞凋亡。
顺铂诱导卵巢损伤，受损卵巢中的颗粒细胞会产生过量的活性氧自由基，引起脂质过氧化，诱发铁死亡，出现卵泡发育障碍及卵巢组织纤维化，导致卵巢功能减退[9]。近年来，铁死亡在女性生殖系统中的研究逐渐深入，有学者对处于健康期和卵泡闭锁早期的猪卵巢组织进行转录评估发现，铁累积在卵泡闭锁早期阶段就参与了铁死亡的进程，而经典细胞凋亡过程于卵泡闭锁后期才出现[15]。有研究发现，SIRT1 可通过激活Nrf2 来发挥抗铁死亡作用，激活的Nrf2 可以通过诱导唯一的膜铁转运蛋白FPN 的表达，上调铁蛋白重链Fth 及铁蛋白轻链Ftl 的表达，从而抑制细胞内游离铁的积累，进而抑制GPX4 基因的转录[16-18]。另有研究发现，SIRT2 可以促进GPX4 的表达[19]。本研究实验数据表明，顺铂组SIRT1、Nrf2、FPN、Fth、Ftl、SIRT2 及GPX4 的mRNA 表达减少，LIPUS 照射后，上述各细胞因子除SIRT2 外，表达水平均升高，提示LIPUS 可能通过调控SIRT1 的表达，从而调控下游各细胞因子的水平，降低细胞中铁死亡的水平。
Wang 等[20]通过诱导铁过载模型明确铁累积过量会导致猪卵母细胞内活性氧过量产生、游离硫醇水平下降，线粒体功能出现障碍。同时化疗所诱导的氧化应激会干扰卵巢细胞中促凋亡和抗凋亡分子的动态平衡[9]。本研究对小鼠卵巢组织病理切片进行氧化应激相关因子的免疫组化染色，结果显示顺铂组小鼠氧化应激相关因子3-Nit、4-HNE 及8-OHdG 表达增加，LIPUS 照射后各因子表达减少，说明LIPUS 可以缓解顺铂所致小鼠氧化应激损伤。
综上所述，LIPUS 可缓解顺铂所致小鼠卵巢损伤，减少卵巢细胞的死亡，这一作用可能是通过调控一系列可导致细胞死亡的因子水平来实现的，如细胞凋亡、铁死亡及氧化应激，LIPUS 有望为年轻女性化疗患者的生育力及卵巢功能提供一种可行的、无创的保护方式。

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